(六)单克隆抗体的应用
利用免疫动物制备的抗体属于多克隆抗体,常因不只针对一种抗原决定簇而影响血清学试验的特异性。而应用淋巴细胞杂交瘤技术制备的单克隆抗体是针对单一抗原决定簇的抗体,由于它具有特异性强、敏感性.高、质量稳定和易于标准化等优点,越来越多地代替前者而被用于家畜传染病的诊断。
五、变态反应诊断
迟发型变态反应是一种检查细胞免疫的有效方法,常用于临床诊断。结核菌素皮内变态反应是其中一个典型例子。感染结核菌的牛于皮内接种结核素(结核菌培养滤液),经72h后根据皮肤炎性应程度对牛结核菌病作出诊断。变态反应诊断方法常用于鼻疽、副结核病、布氏杆菌病和弓形体病等。变态反应诊断法具有操作简单、特异性较高的优点。
六、分子生物学诊断
分子生物学诊断又称基因诊断,主要是针对不同病原微生物所具有的特异性核酸序列和结构进行检测。在传染病诊断方面,具有代表性的技术主要有:核酸探针、核酸电泳和PCR技术。
(一)核酸探针技术
核酸探针技术是近年来发展起来的通过DNA分子杂交检测核酸的新技术。它是根据2条单链DNA(或DNA与RNA)之间互补碱基序列能专一配对的原理进行的,因而具有高度的敏感性和特异性。一般利用已标记的某种DNA(或RNA)片段作为探列进行检测。该方法有三大组成部分:①待检核酸;②固相载体(NC硝酸纤维膜或尼龙膜);③用同位素、酶或荧光标记的核酸探针。
核酸探针技术有:原位杂交(直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交反应);斑点杂交(将待检的核酸或细胞裂解物,经过变性后直接点在固相膜上进行杂交反应);Southern杂交(将待检DNA经内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳后,转移到固相膜上进行杂交反应。
Northern杂交(方法与Southern杂交基本相同,但待检的是RNA)。探针材料是取自已知病原微生物的核酸片段、已知DNA(或cDNA)核酸片段或者根据已知病原微生物核酸序列设计并人工合成的特异性聚核酸片段,总之探针核酸是已知的。然后将其标记上同位素、地高辛、生物素等制备成探针。固定在支持物上的模板核酸与探针经过变性、复性,根据碱基配对原则,如果模板核酸与探针核酸同源,则两者合,否则两者不发生结合。
利用放射自显影或酶底物反应方法,在固相压的相应位置可见预期条带,进时-可作出准确诊断,基因探针方法敏感性高,特异性强,简便快速,百以从混合标本中正确鉴定出目的病原微生物
核酸探针技术目前主要应用于以下几个方面:①对病毒、细菌、支原体、立克次体、寄生虫和原虫等病原均能作出快速准确诊断;②在混有大量勇菌或混合感染样品中直接检出主要病原,包括难以在体外培养的病原;③检出带菌、带毒等隐性感染动物;④可对病原微生物进行准确分类鉴定;⑤可对动物产品或食品进行卫生检验。