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生猪价格汇总:饲料酶应用及其酶活测定方法

来源: 互联网   2014-06-23 01:21:39   查看:  次

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植酸磷是所有谷物和植物性蛋白质饲料中磷的一种贮存形式,不能被单胃动物利用。如果植酸磷被排来 环境中,环境中微生物利用这些植酸磷后,磷就被开释来 环境中,成为污染源。植酸酶能够作用于植酸磷,减少饲料中无机磷的添加。另外,植酸酶能够提高蛋白质利用率,降低粪中氮的排出。

3    饲料酶的活性估量

    饲料酶的活性估量 方法可以通过体内评定法和体外测定法进行。除了体内法以外,摘 用其它测定方法比较不同酶制剂产品的质量是很困难的。这是因为不同的饲料酶是不同的微生物通过发酵过程产生的,酶产品中含有的酶活性差别较大。并且各种微生物所分泌的酶的最佳pH值、温度和对底物的亲和性都不相同。因此,要想找来 一种能够测定同一类型的不同品种的酶(具有不同的pH值)活性的方法是不可能的。所以用体外法还不能评判 酶在体内的作用成效。为了保证所生产的酶的活性平稳和保证 用户的利益,不同的生产厂家制定了各自的测定酶活的方法。这些方法都是用来测定饲料添加剂、预混料和全价料中酶的活性。目前测定饲料中酶活的方法主要有:

3.l  还原糖法(Reducing sugar release)

    这种方法是摘 用化学合成或从自然界提取的酶的底物来进行的。酶与底物在特定的条件(温度、PH值和底物浓度)下反应。反应产物是还原糖,通过比色确定还原糖的数量,同时制作标准曲线。酶的活性表示为每分钟产生lmmol的产物所需要的酶量(mg或ml)。

3.2  比色法(Colorimetric assays Ⅰ)

   这种方法是对底物进行化学修饰,使其带有特定的可溶性生色基团物质,该生色基团能够产生特定颜色。在酶与底物发生反应后,生色基团就被开释出来,用分光光度计可以测定颜色的深度,并制作标准曲线。与已晓 标准酶的活性进行比较,运算 出该酶的活性。这种方法并不能区分内切酶和外切酶,但是通常认为这种方法更适合于测定外切酶。目前摘 用这种方法测定所需的底物被工业上广泛摘 用。

3.3  比色法(Colorimetric assnysⅡ)

    这种方法是通过生色基团结合酶作用底物分子的中间产物(sub-unit)来确定酶的活性。如 PNPG(para nitro phenyl),该种物质与半乳糖结合形成一种乳糖(或葡萄糖)类似物。在酶的作用下,开释出PNP,利用其它方法测定PNP的含量。上述的方法通常只在生物化学实验室摘 用,饲料酶作用的底物是高分子量的物质,不宜摘 用。

3.4  黏度法(Viscometric assays)

    这种方法是根据酶能够降低一定浓度的标准底物(控制pH值、温度等条件)的黏度的能力来确定酶的活性。利用的底物主要有化学合成的底物(如 CMC用于纤维素酶的测定)和自然提取的底物(如小麦阿拉伯木聚糖用于木聚糖酶的测定)。测定的酶的活性值是通过与同时测定的标准酶活性的比较,来确定酶的活性。

    这种方法的特点是通过降低底物的新度来反映酶的活性,这也正是酶在体内起作用的重要特点 。化学合成的底物的成效要优于自然提取的底物,因为化学合成的底物不利于酶的接触。

3.5 免疫学法(Immunological methods)

    用于酶活性估量 的免疫学法包括ELISA法和免疫凝胶扩散法。这两种方法是根据酶与抗体之间发生反应,然后ELISA法通过第二步反应,凝胶扩散法则通过印染过程来确定酶的活性(与标准添加酶的水平对比)。

    这些方法是非常灵敏的,能够检测来 极低水平的酶蛋白。但它们的缺点是对于每个产品的酶需要尤其 的抗体,另外作为抗体能够与非酶蛋白质发生反应。由于抗体本身所用的蛋白质是特定的,因此,由不同生产者生产的同种类型的酶之间是没有交叉性的。另外,摘 用实验动物的敏锐 性也值得探讨。

3.6  凝胶扩散法(Gel Diffusion methods)

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