猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

来源： 2016-11-15 09:59:11| 查看：次

2．3．1菌落杂交分析法鉴定Bb

美国Register等应用双色杂交法同时检测Bb和TPm。通过双荧光标记的抗体可以同时杂交4700 bp的BbalcA基因和大小l 200 bp的T+Pm toxA基因探针，alcA为地高辛标记，杂交后有Bb存在处显粉红色，取样3 d后即可获得结果。检测表现AR临床症状的84份鼻拭子样品，检测结果与其他常规鉴定方法对比有极高的敏感性和特异性，而且该法是一种菌落杂交分析法，鉴定细菌从初级培养物中的单一菌落挑选，不需要对受检细菌进行纯代培养，但是操作过程复杂，需要专门的研究技术人员才能完成。因此，该方法的普遍利用还有一定的局限性。

2．3．2 PCR方法检测Bb

Hozbor等针对Bb鞭毛基因的上游序列设计的引物建立了PCR的检测方法，该方法可以扩增出Bb特异性的大小为237 bp的片段，并能够和百日咳波氏杆菌(B．pertussis)及副百日咳波氏杆菌(B．psrapertussis)区别开。且细菌只需要经过初代培养即可作为PCR的模板使用，该法具有很好的特异性和敏感性，细菌量少于l0个的样本也可以直接检出。国内鲁承等利用多重PCR方法可以同时鉴定Bb和T+Pm感染。使用PCR方法不需做目的菌的分离培养，在高浓度的目的菌存在时，不必做增菌培养，可直接从所采取的鼻腔分泌物中分离DNA应用于检测，并且不必考虑杂菌的过度增殖，为临床上确定猪传染性萎缩性鼻炎病原菌感染建立了新途径。杨咏洁等证实PCR检测的检出率是细菌检查法的5．25倍，是微量凝集法的1．75倍，具有较好的特异性和敏感性。

综上所述，猪源支气管败血波氏杆菌是猪的重要病原菌，现有的分离鉴定方法均存在实验条件要求高、操作繁琐等缺点，亟需开发更多灵敏性高、特异性好、可在现场使用的快速诊断方法。

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