在过去几年中,非洲猪瘟(ASF)已成为大流行,在欧盟内部受影响的野猪种群是主要驱动因素。这带来了新的挑战,即农产品风险评估需求和节肢动物机械媒介的作用。
应《非洲猪瘟病毒在饲料、垫料和机械媒介中的生存及其在病毒传播中的潜在作用》(GP/EFSA/ALPHA/2021/09)的要求,选择相关饲料和垫料进行稳定性实验。所有基质都被ASFV污染,并在5种不同的环境条件(-20℃、4℃、10℃、20℃和37℃)下保存长达9个月。使用实时PCR和病毒分离技术在不同时间点对重复样本进行评估。此外,对三种类型的吸血节肢动物的可能作用进行了评估。
详细研究了代表性节肢动物在以感染性血液为食后,病毒基因组和感染性病毒在体内潜伏的时间。最后一步,获得了进一步的概念验证数据,证明节肢动物通过摄入被ASFV污染的血液而传播。总之,传染性病毒的检测在大多数基质中相当有限,而病毒基因组的检测在整个研究期间是可能的。
然而,在较低的温度下,病毒在饲料基质上可以稳定几天甚至几周,尤其是在甜菜和土豆上。青草、青贮草和青贮玉米在任何时间点都分离不到病毒。对该病毒在节肢动物体内可检出性的研究表明,根据温度和摄食量的不同,该病毒通常在一定时间内可检出。在低温条件下,稳蝇的病毒检出率超过了预期,超过168小时。饲喂试验未导致猪感染。然而,这种概念验证研究的力量是有限的。
总结
在过去几年中,非洲猪瘟(ASF)已成为大流行,在欧盟内部受影响的野猪种群是该流行病的主要驱动因素。这种情况带来了新的挑战,即需要对在受影响地区收获的农产品进行风险评估,这些农产品有可能接触受影响动物的尸体或体液。
为响应“非洲猪瘟病毒在饲料、垫料和机械载体中的生存及其在病毒传播中的潜在作用”(GP/EFSA/ALPHA/2021/09)的呼吁,该联盟开始提供关于非洲猪瘟病毒(ASFV)在植物源性饲料和垫层材料中的稳定性和灭活(存活)的可靠数据。考虑到欧洲的生产参数,我们选择了14种相关的饲料和垫料,即青草、青贮草、干草、树皮、泥炭、木屑、青贮玉米、油菜籽、大麦、小麦、燕麦、秸秆、土豆和饲料用甜菜进行了详细的稳定性试验。所有基质都被ASFV人工污染,并在5种不同的环境条件(-20℃、4℃、10℃、20℃和37℃)下保存长达9个月。
在不同的时间点使用实时PCR进行病毒基因组检测和易感原代和/或永久细胞上的进行病毒分离,评估重复样本(至少在三次技术运行中测试的生物三重副本)。为了便于对病毒分离的评估,采用适应细胞培养和/或荧光标记的ASFV毒株加入阴性猪血中进行筛选。对最近的德国ASFV毒株(来自受感染动物的血液)重复了关键时间点。通过在干草、秸秆和小麦上使用有机酸来降低风险的概念验证完成了这些研究。
研究表明,在进行稳定性测试时,方法是一个关键问题。尽管存在技术障碍,但使用原代细胞的现有系统提供了最敏感的结果,因此更可取。
病毒基因组的稳定性被认为是非常高的,因此病毒基因组可以在很宽的温度范围和很长的时间内检测到也就不足为奇了。青贮、青草和干草的基因组检测比较困难。这些问题只能通过适当的提取方法来部分克服。我们假设这些抑制作用仍然表明非常迅速的失活。
对于传染性病毒的检测情况则不同。尽管进行了多次尝试,但这种传染性病毒只能在少数样品中检测到,而且只能在较低的温度下检测到。令人惊讶的是,这种病毒经常在甜菜和土豆中被检测到。在这里,病毒在代表深秋的低温下存活了几周。
垫料也得到了类似的结果。病毒的检测仅限于较低的储存温度和较短的时间。在4℃下,除一个树皮样品在28天后仍保持弱阳性外,通常在7天后发生失活。即使在10℃下,7天后也只有树皮检测到了一次。在实验条件下,在中等温度下保存总是适合于灭活病毒。用丙酸处理几乎没有额外的缓解效果,这与普遍较低的检出率有关。
虽然公认只有鸟thodoros属的软蜱可以作为非洲猪瘟病毒(ASFV)的有效生物载体,即复制病毒并维持其在其阶段,但其他吸血节肢动物作为机械载体的可能作用仍在讨论中。特别是,在目前的非洲猪瘟流行中观察到的季节性,在夏季的几个月里,养猪场爆发的趋势非常明显,这提出了一个问题,即节肢动物媒介是否可以在疾病动力学中发挥作用,作为感染野猪种群和家猪之间或家猪场内部和之间的桥梁。该研究联盟旨在提供关于机械媒介在非洲猪瘟传播中的作用的可靠数据。详细研究了代表性节肢动物在食用感染性血液后携带感染性病毒的时间。为此,调查了白纹伊蚊和钙纹伊蚊的实验室菌落以及野外捕获的虻。