石建玲等根据幽门螺杆菌23SrDNA序列设计引物和探针，构建质粒标准品，建立实时荧光定量PCR体系并进行方法学评判 ，对2012——05——10收集的100份临床样本进行检测并同时应用免疫组化及银染方法进行比较估量 发觉：检测范畴宽，在107copies/l——102copies/l(指1l溶液里面DNA/RNA的拷贝数是多少个)内均出现 良好的线性关系，且相关系数为1;与多种细菌均无交叉反应，特异性好;检测时间短，整个PCR反应过程仅需70min;并可在不同拷贝数的标准品批内重复测定，对临床其它消化道病原体不涌现特异性的扩增曲线;实时荧光定量PCR具有灵敏度和特异性高及重复性好等优点。国外也有将酶联免疫吸附测定与PCR技术联用建立有害微生物检测方法的报道，有效的提高了有害微生物的检出率。5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　1.4 生物阻抗法5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　生物阻抗法的原理是利用由微生物新陈代谢引起的培育基电学特性变化快速检出样品中微生物的含量。阻抗法具有能区分活细胞和死细胞的优势，而死细胞常常无致病性，保证 食品与饲料安全的关键就是检验活细胞的数量。陈江利用阻抗法检测啤酒有害乳酸菌，630A培育基(奥地利SY——LAB公司)较适合于阻抗法，用E值作为阻抗值变化的判定 标准，与传统培育基法检测结果相比，阻抗法的检测结果准确可靠，能够将检测时间缩短至72h。此法检测速度很快，但只能确定污染程度。5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　1.5 蛋白质芯片技术5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　蛋白质芯片技术又称蛋白质(微)阵列，是指将已晓 的大量蛋白质(如酶、抗原、抗体、受体、配体、细胞因子等)固定在经化学修饰的固相载体(璃片、硅片等)上，在保留蛋白质物化性质的基础上，蛋白质与载体表面结合，再用激光扫描系统或者电感耦合器件获取相关图像;然后用专门的运算 机软件估量 图像、定性定量结果。Howell等摘 用俗称软蚀刻的微接触印刷技术(microcontact printing，CP)制作出了一种可以检测大肠杆菌E。coli O157∶H7及鲑肾杆菌(renibacterium salmoninarum)的抗体微阵列，结果掩饰：此芯片与其他有害微生物的交叉反应少， 检出浓度为7×107cfu/ml，检测时间是40min，是一种很有效的微生物检测方法。5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　方珍建立了检测E。coli O157∶H7的液相蛋白芯片方法。通过绘制检测曲线，分别应用该方法及H2O作溶解剂的液相芯片方法检测实际牛肉样品。比较该方法与细菌分离培育法的阳性检出率，能检出阳性的最低浓度为103cfu/ml(増菌后)，最低检出限为100cfu/ml;与18种肠道菌无交叉反应，特异性良好;3次重复实验，批间变异系数7.61，重复性良好;应用该方法检测牛肉样品中人工添加细菌，能检出阳性的最低浓度为0.5cfu/ml(增菌前);应用该方法检测154份实际牛肉样品，检出阳性样品19份，而细菌培育法检出阳性样品16份。蛋白质芯片技术是一种高特异性、高灵敏度、高通量、重复性好、应用性强、适用范畴广且微型化的估量 技术，在生命科学的各个研究领域有很好的发展前景，但同基因芯片技术一样，检测费用高，发展还不成熟。5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　1.6 纳米金标记技术5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　纳米金标记技术是指直径在1nm——100nm金的微小颗粒，具有高电子密度，介电特性和催化作用，可以与多种生物大分子结合，且不影响生物大分子的生物活性。近年来，基于纳米金标记的快速检测研究在有害微生物方面应用比较多，检测的微生物种类也比较多，国内外科技工作者通过对纳米金颗粒表面特性的处理以及在纳米金颗粒表面标记上特定的寡核苷酸探针，开发研究出了新的微生物检测系统。5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　刘霞利用氨基偶联法在传感器表面固定多克隆抗体(PAb)作为一抗，金纳米粒子(AuNPs)标记的大肠杆菌E。coli O157∶H7的多克隆抗体(PAb)作为二抗，通过三明治方法用双通道表面等离子体共振(SPR)传感器对E。coli O157∶H7进行检测。SPR直接法检出限为103cfu/ml，线性范畴为103cfu/ml——109cfu/ml;金纳米粒子增强三明治法的检出限为10cfu/ml，线性范畴为10cfu/ml——1010cfu/ml，灵敏度提高100倍，检测范畴更宽，检测时间缩短，筛选性和重现性较好。此技术具有简单、快速、灵敏度高、特异性强、价廉、样品所需量少等优点，适合现场挑选 ，在饲料检测中有着广泛的应用价值和发展前景。5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧

　　2 饲料中有害微生物快速检测设备5wc中国养猪网-立足饲料，服务畜牧