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口蹄疫的实验室诊断

来源:中国养猪网 2010-10-19 15:27:37| 查看:

口蹄疫的实验室诊断[/page] 

1.样品采集和运输:由各级兽医行政防疫机关派专人采集和护送到上一级机构。组织样品应采集未破裂或刚破裂的新鲜水疱皮,在不能获得水疱皮的情况下,也可采集血液和食道、咽黏液样品,死亡病例可采集心肌组织或血液,但若可能仍以水疱皮最佳。至少采集3-4头动物的样品,置低温条件下安全送交实验室。

2.抗原检测:采用PBS缓冲液研磨离心制备10%水疱皮组织悬液或离心澄清黏液样品,采用型特异性标准血清,进行补体结合试验鉴定病毒血清型。此方法检测费用低但检测敏感性、特异性不足,并且受前补体和抗补体因子的影响。目前,更多采用快速、敏感、特异的免疫捕捉ELISA检测方法,该方法操作简便且在3h内可获得型特异性检测结果。

3。病毒分离鉴定:将野外样品组织悬液离心澄清,接种未断奶乳鼠和敏感细胞系(牛甲状腺原代细胞,猪、牛、羊羔肾原代细胞,BHK-21IB-RS-2传代细胞系),进行病毒分离,通常连续盲传3代,观察乳鼠发病死亡情况和特异性细胞病变,进行病毒分离。病毒鉴定可采用补体结合试验或免疫捕捉ELISA

4.核酸检测和序列分析:目前已建立同时鉴别7个不同血清型的特异性复合RT-PCR检测技术对本病进行诊断和鉴别。在每个血清型内根据病毒基因(通常采用VPI编码基因ID)核昔酸序列的同源性差异,划分不同的基因型,进一步分析毒株间的起源、地理分布及系统发育关系。

5.血清学检測:采用微量病毒中和试验和液相阻断ELISA检测血清样品中的特异性抗体,用于本病诊断。微量病毒中和试验和液相阻断

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