猪繁殖与呼吸综合症病毒的分离鉴定

来源： 2016-11-15 09:59:10| 查看：次

2 结果
2．1病毒分离
将过滤后的病料悬液分别接种于Marc-145细胞，盲传前3代未出现CPE，至第4代开始出现CPE，病变特征为细胞折光性增强、变圆、膨大，部分细胞紧缩呈葡萄串状，随后皱缩，继而灶性脱落，出现大片空洞，与PRRSV典型CPE相符。
2．2电镜观察
将病毒超离产物经负染透视电镜观察，可见典型的以球形或卵圆型为主的具囊膜的病毒粒子，直径大小为50～80 nm，核心直径为20～40 nm。
2．3分离病毒的TCID50测定
按Reed Muench法计算得出分离病毒在Marc-145细胞上的TCID50为l0-4.7／0．1 mL。
2．4 间接免疫荧光试验
用PRRSV VR-2332抗体阳性血清进行间接荧光抗体染色，检测结果发现感染细胞的胞浆内出现黄绿色特异性荧光，而对照组的Marc-145细胞均未见到荧光。
2．5动物回归试验
接毒组的仔猪在接毒2—3 d后，仔猪体温升高至41℃以上，持续高热9～15 d。发病初期临床表现为食欲不振、精神沉郁、呼吸困难、皮肤发红，后期表现为消瘦、四肢无力、喜卧、耳尖发紫等症状。接毒后l5 d病情严重的1头猪死亡，剖检可见腹股沟、肠系膜淋巴结肿大，肺肉样病变，脾脏梗死，表面有点状红色丘疹；另外1头逐渐耐过康复。试验组血清PRRS RT-PCR检测试剂盒检测结果为阳性；对照组2头猪无任何症状，血清试剂盒检测结果为阴性。
2．6 RT-PCR鉴定
对发病猪的组织病料、分离株细胞培养物、攻毒发病仔猪组织病料进行PRRSV的RT—PCR检测，产物经琼脂糖凝胶电泳检测，均可扩增出约400 bp大小的条带，与阳性对照相符(图3)；阴性对照未见条带。
3讨论
本试验从安徽省部分猪场疑似PRRS发病仔猪的肺脏、脾脏、淋巴结等组织中分离到l株病毒，并进行了一系列鉴定。根据分离毒株致Marc-145的特征性病变、电镜观察、间接免疫荧光试验、动物回归试验、RT．PCR的结果，判定所分离的

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