摘要：为了解现有市售腹泻疫苗的免疫效果，购买几种有代表性的腹泻疫苗，包括活疫苗和灭活疫苗，分别免疫接种仔猪并对疫苗的安全性和免疫效果进行检测评价。结果表明：所测的几种腹泻疫苗都具有良好的安全性；综合评价结果表明“胃腹流康”具有良好的免疫效果。
关键词：腹泻疫苗；免疫效果；中和抗体效价；IgG抗体
病毒性腹泻是目前给我国养猪业造成巨大经济损失的主要疾病之一，引起猪群腹泻的因素较多，其中以危害最为严重的病毒性因素主要是猪流行性腹泻病毒。华派生物工程集团有限公司诊断中心对全国各地腹泻病料的检测结果表明，PEDV的阳性率居于首位，是造成猪场仔猪腹泻的主要病毒性因素之一，PEDV除单独感染外，还可与TGEV、PDCoV等其他病毒混合感染。目前对PEDV和TGEV的感染发病猪尚无特效治疗药物，通过接种疫苗降低PEDV和TGEV的感染风险，从而达到防控两种疾病的目的，成为最为经济有效且可靠的方法。
目前已批准上市的腹泻疫苗包括活疫苗和灭活疫苗，为了对市售腹泻疫苗的免疫效果进行评价，本研究分别购买有代表性的几个不同厂家所生产的灭活疫苗和活疫苗，免疫接种仔猪后对疫苗的安全性和免疫效果进行综合评价和比较。
1 材料
1.1 疫苗 从市场上购买市售的5种腹泻疫苗，包括腹泻灭活疫苗和腹泻活疫苗；从华派生物工程集团有限公司生产的“胃腹流康”疫苗中随机抽取一批用于比对试验。
1.2 检测试剂盒 PEDV IgG抗体检测试剂盒，购自加拿大Biovet公司。
1.3 细胞 ST细胞及Vero细胞，由华派生物工程集团有限公司保管及供应。
1.4 试验动物 21日龄健康仔猪。
2 方法
2.1 盲样的设置 将每种疫苗原始标签去掉后，按厂家说明书进行稀释后，随机标为疫苗A、疫苗B、疫苗C、疫苗D、疫苗E和疫苗F，再交由实验人员进行实验和检测。
2.2 免疫接种 选取21日龄仔猪35头，随机分为7组，标记为A组至G组，A组至F组为实验组，G组为对照组。实验组A组至G组分别免疫接种相对应的疫苗（接种途径按疫苗使用说明书进行），首免后14天进行加强免疫，对照组G组接种2ml生理盐水。
2.3 安全性评价
2.3.1 临床症状观察 各组试验猪接种后，观察并记录免疫接种疫苗是否存在明显的应激反应，之后每天逐头观察记录精神、食欲等是否正常，是否出现临床症状等。
2.3.2 体温变化情况 测定各组试验猪接种前2天上午、下午和免疫当天上午的体温，取其平均值作为基础体温，接种后测定并记录当天下午和其后3天上午、下午体温，观察仔猪接种疫苗后体温变化情况。
2.4 免疫效果评价 仔猪于接种前、接种后7天、14天、21天、28天、35天、42天和49天采血并分离血清，分别进行中和抗体效价和ELISA抗体效价的测定。
2.4.1 中和抗体效价测定
2.4.1.1 PED中和抗体效价测定 使用Vero细胞，采用微量中和法测定PED中和抗体效价。将血清作4倍系列稀释，稀释至1:512，测定PED中和抗体效价。
2.4.1.2 TGE中和抗体效价测定 使用ST细胞，采用微量中和法测定TGE中和抗体效价。将血清作4倍系列稀释，稀释至1:512，测定TGE中和抗体效价。
2.4.2 ELISA抗体测定 使用Biovet的PEDV IgG抗体检测试剂盒对试验组和对照组所有试验猪的血清进行检测。
3 结果
3.1 安全性试验结果
3.1.1 临床症状观察结果 所有疫苗在注射后均无明显应激反应；除疫苗B的1头试验猪免疫接种后第2天出现精神不振和食欲减退外，其余试验猪和对照猪均无全身和局部不良反应。结果见表1。
表1 临床症状观察结果
关键词：腹泻疫苗；免疫效果；中和抗体效价；IgG抗体
病毒性腹泻是目前给我国养猪业造成巨大经济损失的主要疾病之一，引起猪群腹泻的因素较多，其中以危害最为严重的病毒性因素主要是猪流行性腹泻病毒。华派生物工程集团有限公司诊断中心对全国各地腹泻病料的检测结果表明，PEDV的阳性率居于首位，是造成猪场仔猪腹泻的主要病毒性因素之一，PEDV除单独感染外，还可与TGEV、PDCoV等其他病毒混合感染。目前对PEDV和TGEV的感染发病猪尚无特效治疗药物，通过接种疫苗降低PEDV和TGEV的感染风险，从而达到防控两种疾病的目的，成为最为经济有效且可靠的方法。
目前已批准上市的腹泻疫苗包括活疫苗和灭活疫苗，为了对市售腹泻疫苗的免疫效果进行评价，本研究分别购买有代表性的几个不同厂家所生产的灭活疫苗和活疫苗，免疫接种仔猪后对疫苗的安全性和免疫效果进行综合评价和比较。
1 材料
1.1 疫苗 从市场上购买市售的5种腹泻疫苗，包括腹泻灭活疫苗和腹泻活疫苗；从华派生物工程集团有限公司生产的“胃腹流康”疫苗中随机抽取一批用于比对试验。
1.2 检测试剂盒 PEDV IgG抗体检测试剂盒，购自加拿大Biovet公司。
1.3 细胞 ST细胞及Vero细胞，由华派生物工程集团有限公司保管及供应。
1.4 试验动物 21日龄健康仔猪。
2 方法
2.1 盲样的设置 将每种疫苗原始标签去掉后，按厂家说明书进行稀释后，随机标为疫苗A、疫苗B、疫苗C、疫苗D、疫苗E和疫苗F，再交由实验人员进行实验和检测。
2.2 免疫接种 选取21日龄仔猪35头，随机分为7组，标记为A组至G组，A组至F组为实验组，G组为对照组。实验组A组至G组分别免疫接种相对应的疫苗（接种途径按疫苗使用说明书进行），首免后14天进行加强免疫，对照组G组接种2ml生理盐水。
2.3 安全性评价
2.3.1 临床症状观察 各组试验猪接种后，观察并记录免疫接种疫苗是否存在明显的应激反应，之后每天逐头观察记录精神、食欲等是否正常，是否出现临床症状等。
2.3.2 体温变化情况 测定各组试验猪接种前2天上午、下午和免疫当天上午的体温，取其平均值作为基础体温，接种后测定并记录当天下午和其后3天上午、下午体温，观察仔猪接种疫苗后体温变化情况。
2.4 免疫效果评价 仔猪于接种前、接种后7天、14天、21天、28天、35天、42天和49天采血并分离血清，分别进行中和抗体效价和ELISA抗体效价的测定。
2.4.1 中和抗体效价测定
2.4.1.1 PED中和抗体效价测定 使用Vero细胞，采用微量中和法测定PED中和抗体效价。将血清作4倍系列稀释，稀释至1:512，测定PED中和抗体效价。
2.4.1.2 TGE中和抗体效价测定 使用ST细胞，采用微量中和法测定TGE中和抗体效价。将血清作4倍系列稀释，稀释至1:512，测定TGE中和抗体效价。
2.4.2 ELISA抗体测定 使用Biovet的PEDV IgG抗体检测试剂盒对试验组和对照组所有试验猪的血清进行检测。
3 结果
3.1 安全性试验结果
3.1.1 临床症状观察结果 所有疫苗在注射后均无明显应激反应；除疫苗B的1头试验猪免疫接种后第2天出现精神不振和食欲减退外，其余试验猪和对照猪均无全身和局部不良反应。结果见表1。
表1 临床症状观察结果
3.1.2 体温变化情况 试验猪接种前2天和接种当天的体温平均值作为基础体温，接种后疫苗后的体温与基础体温进行比较。结果疫苗B试验组有1头仔猪体温在接种当天体温升高至40.2℃，第二天体温下降至39.8℃，稽留未超过4个温次；其余仔猪体温升高均未超过1℃，稽留未超过4个温次。各组接种疫苗前后的试验猪平均平均变化情况见图1。
图1 各免疫组免疫接种后平均体温变化情况
3.2 免疫效果评价试验结果
3.2.1 中和抗体效价测定结果
3.2.1.1 PED中和抗体效价测定结果 疫苗免疫接种后不同时间采血进行PED中和抗体效价测定，结果疫苗的PED中和抗体效价在免疫接种后第14天开始上升，疫苗F的PED中和抗体效价几何平均值高于其余疫苗，且高抗体效价持续时间长于其余疫苗。结果见图2。
3.2 免疫效果评价试验结果
3.2.1 中和抗体效价测定结果
3.2.1.1 PED中和抗体效价测定结果 疫苗免疫接种后不同时间采血进行PED中和抗体效价测定，结果疫苗的PED中和抗体效价在免疫接种后第14天开始上升，疫苗F的PED中和抗体效价几何平均值高于其余疫苗，且高抗体效价持续时间长于其余疫苗。结果见图2。
图2 免疫接种后PED中和抗体效价测定结果
3.2.1.2 TGE中和抗体效价测定结果 疫苗免疫接种后不同时间采血进行TGE中和抗体效价测定，结果疫苗TGE中和抗体效价在免疫后21天至28天达到较高水平，其中疫苗F的TGE中和抗体效价几何平均值高于其余疫苗。结果见图3。
3.2.1.2 TGE中和抗体效价测定结果 疫苗免疫接种后不同时间采血进行TGE中和抗体效价测定，结果疫苗TGE中和抗体效价在免疫后21天至28天达到较高水平，其中疫苗F的TGE中和抗体效价几何平均值高于其余疫苗。结果见图3。
图3 免疫接种后TGE中和抗体效价测定结果
3.2.2 ELISA抗体测定结果 试验猪免疫后不同时间采血进行PED IgG抗体测定，结果疫苗B和疫苗F的IgG抗体较其余疫苗高。结果见图4。
3.2.2 ELISA抗体测定结果 试验猪免疫后不同时间采血进行PED IgG抗体测定，结果疫苗B和疫苗F的IgG抗体较其余疫苗高。结果见图4。
图4 免疫接种后IgG抗体测定结果
4 小结与讨论
对于腹泻疫苗效果的评价，针对活疫苗可以采用病毒含量的测定法进行评价，但病毒含量测定，不能完全真正的反应疫苗的免疫效果，因此使用动物进行免疫接种以评价腹泻疫苗的免疫效果更为重要，而免疫接种进行抗体的测定，可以避免使用强毒进行攻毒时造成的病毒扩散以及导致猪场发病的问题。在进行抗体测定时，可采用为中和抗体效价测定和IgG抗体测定两种测定方法。中和抗体效价反映血清中含有可中和病毒能力的抗体水平，因此是最能反映疫苗免疫效果的方法之一。中和抗体效价的检测需使用到细胞、对操作环境要求较高、操作繁复且耗时较长；ELISA抗体检测方法更为简单、便捷，但其ELISA抗体检测结果与中和抗体效价测定不呈正相关关系，因此猪场应根据自身情况，综合选择和采用检测方法进行疫苗的评价。
本试验对6种腹泻疫苗——市售的5种疫苗以及华派生物工程集团有限公司生产的胃腹流康疫苗——进行安全性和免疫效果的评价及对比，6种疫苗包含有灭活疫苗和活疫苗。在安全性评价过程中，除观察免疫接种后的临床症状外，还对免疫前后仔猪体温变化情况进行测定；在免疫原性评价过程中，分别采用中和抗体效价测定和IgG抗体测定进行评价。从安全性综合评价结果来看，几乎所有的疫苗均具有良好的安全性，仅疫苗B免疫接种仔猪后出现高温现象，这可能是猪只个体差异造成的。综合免疫原性综合评价结果，疫苗F免疫效果优于其他疫苗。
试验结束后进行接盲，疫苗F为华派生物工程集团有限公司生产的“胃腹流康”疫苗，该疫苗在前期的病毒含量检测综合评价试验中，结果优于其余疫苗；在免疫效果综合评价试验中，结果优于其余疫苗。胃腹流康是所有腹泻疫苗中唯一配备有专利稀释液的产品，其专利稀释液可显著提高疫苗免疫后的抗体水平和持续时间。试验结果表明：“胃腹流康”疫苗具有良好的安全性和免疫原性，该疫苗各方面的综合评价中均表现优秀，可以作为养猪场用于预防控制猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的首选疫苗。
4 小结与讨论
对于腹泻疫苗效果的评价，针对活疫苗可以采用病毒含量的测定法进行评价，但病毒含量测定，不能完全真正的反应疫苗的免疫效果，因此使用动物进行免疫接种以评价腹泻疫苗的免疫效果更为重要，而免疫接种进行抗体的测定，可以避免使用强毒进行攻毒时造成的病毒扩散以及导致猪场发病的问题。在进行抗体测定时，可采用为中和抗体效价测定和IgG抗体测定两种测定方法。中和抗体效价反映血清中含有可中和病毒能力的抗体水平，因此是最能反映疫苗免疫效果的方法之一。中和抗体效价的检测需使用到细胞、对操作环境要求较高、操作繁复且耗时较长；ELISA抗体检测方法更为简单、便捷，但其ELISA抗体检测结果与中和抗体效价测定不呈正相关关系，因此猪场应根据自身情况，综合选择和采用检测方法进行疫苗的评价。
本试验对6种腹泻疫苗——市售的5种疫苗以及华派生物工程集团有限公司生产的胃腹流康疫苗——进行安全性和免疫效果的评价及对比，6种疫苗包含有灭活疫苗和活疫苗。在安全性评价过程中，除观察免疫接种后的临床症状外，还对免疫前后仔猪体温变化情况进行测定；在免疫原性评价过程中，分别采用中和抗体效价测定和IgG抗体测定进行评价。从安全性综合评价结果来看，几乎所有的疫苗均具有良好的安全性，仅疫苗B免疫接种仔猪后出现高温现象，这可能是猪只个体差异造成的。综合免疫原性综合评价结果，疫苗F免疫效果优于其他疫苗。
试验结束后进行接盲，疫苗F为华派生物工程集团有限公司生产的“胃腹流康”疫苗，该疫苗在前期的病毒含量检测综合评价试验中，结果优于其余疫苗；在免疫效果综合评价试验中，结果优于其余疫苗。胃腹流康是所有腹泻疫苗中唯一配备有专利稀释液的产品，其专利稀释液可显著提高疫苗免疫后的抗体水平和持续时间。试验结果表明：“胃腹流康”疫苗具有良好的安全性和免疫原性，该疫苗各方面的综合评价中均表现优秀，可以作为养猪场用于预防控制猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎的首选疫苗。
