传染性胸膜肺炎是规模化猪场的最常见的细菌性疾病之一，中国多数猪群属于传染性胸膜肺炎的阳性群，该病对30kg以上的生长育肥猪、后备母猪、基础母猪等危害更多，尤其发生在北方的秋冬疾病。急性造成猪突然死亡，而慢性型造成生长缓慢，料肉高等。故传胸诊断与防控是育肥与母猪群的关键管控点。
那通常可采用哪些实验室诊断方法来诊断传染性胸膜肺炎（APP）呢？如何根据具体情况选择不同的诊断技术呢？又该如何解读检测结果？
01传胸APP的诊断方案
➤大体病理学检查
1）评估是否存在该疾病的特行证组织病变，比如：斑块状出血、坏死等。此病变基本可以确诊。
2）病变部位：肺部。肺部出现坏死出血性实变区域，并伴有纤维素性胸膜炎（见图1）
图1典型的与APP感染相关的坏死出血性肺部病变
3）优点：
•通过肺部的大体病变即可作出初步诊断。
4）缺点：
•猪放线杆菌（Actinobacillus suis）可能引起类似但较轻的病变。
•无法确定血清型。
➤细菌培养
1）分离活菌。
2）样本类型：肺部病变部位。
3）优点：
•可在任何实验室（包括企业内部实验室）进行。
•生物I型需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD，通常通过金黄色葡萄球菌培养菌落提供）。
•生物II型不需要烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）。
•成本相对较低。
4）缺点：
•有时不容易培养，与采样时机、样品保存，分离技术等都有关系。
•无法确定血清型。
•若猪曾接受过抗生素治疗，可能会抑制细菌生长。
➤药敏试验
1）检测APP活菌在不同抗菌药物特定浓度下的体外生长能力。
2）样本类型：肺部分离的活菌。
3）优点：
•确定特定分离株对常用抗菌药物的敏感性或耐药性。
•确定抗菌药物耐药趋势。
4）缺点：
•需获得细菌分离株。
•体外检测结果可能与体内的药效结果会略有不同。
•一些特定抗菌药物可能未进行检测或需额外进行特殊检测。
•成本适中。
➤qPCR通用检测或血清分型检测
1）检测细菌核酸（DNA）的特异性序列。
2）样本类型：肺部和扁桃体。
3）优点：
•高灵敏度。
•通用检测：靶向ApxIV毒素基因。适用于所有APP血清型。
•血清分型检测：靶向ApxI、ApxII和ApxIII毒素基因的不同片段。血清分型与毒素产生情况见表1。
•成本适中：通常可通过组织样本混合检测来降低成本，同时使灵敏度损失最小化。
4）缺点：
•需几种特异性PCR引物以确定血清型。
•并非所有分离株都可分型。目前已发现19种血清型且数量仍在增加。
•并非所有检测方法都经过验证可用于检测扁桃体组织。
表1：各血清型的毒素产生情况
➤ELISA脂多糖-O-抗原（LPS-O-Antigen）检测--分型ELISA
1）检测抗体存在。
2）样本类型：血清。
3）靶标：脂多糖-O-抗原。
4）优点：
•有助于血清分型。
•高灵敏度。
5）缺点：
•由于共有荚膜和脂多糖-O-抗原表位，各血清型间存在大量交叉反应。以下血清型因共享脂多糖-O-抗原而发生交叉反应：血清型1、9和11。血清型3、6、8、15、17和19。血清型4、7和18。
•仅凭一次检测无法确定具体血清型。
•检测所有血清型成本极高且不切实际。
➤ELISA ApxⅣ抗原检测-检测感染
1）检测感染产生的APXIV毒素抗体存在。
2）样本类型：血清。
3）靶标：ApxIV抗原。
4）优点：
•高灵敏度；
•可检测所有APP血清型。
5）缺点：
•无法确定具体血清型。
•无法确定分离株毒力。
02不同诊断技术的结果解读
➤大体病理学检查
1）阳性：通常病变，可做初步诊断
2）阴性：肺部无大体病变。
➤细菌培养
1）阳性：
•生物I型：依赖NAD。
•生物II型：不依赖NAD。
2）阴性：动物不携带胸膜肺炎防线杆菌（阴性），或可能曾接受抗生素治疗。分离技术不成熟等。
➤药敏试验
1）敏感：若抗菌药物能够到达靶组织，可作为治疗的较好选择。
2）耐药：选择不同的抗菌药物。
3）最低抑菌浓度（MIC）：进行检测确保所选抗菌药物在靶器官达到所列MIC值。
➤PCR
1）阳性：
•存在APP的病原。
•可通过基因检测辅助血清分型。
2）阴性：
•猪群未感染，或感染后检测时间太晚。
•可能曾接受抗生素治疗，猪群康复。
•部分分离株无法分型（不可分型）。
➤ELISA脂多糖-O-抗原检测
1）阳性：有助于血清分型或确定血清型组别。
2）阴性：结果为阴性，感染后检测时间太晚或动物可能曾接受抗生素治疗。
➤ELISA ApxⅣ抗原检测
1）阳性：存在病原体。
2）阴性：结果为阴性，感染后检车时间太晚或动物可能曾接受抗生素治疗。
03应用场景
➤生长育肥猪或基础种猪群的猝死或呼吸道疾病
1）大体病变：剖检1-3头近期死亡或因出现咳嗽症状的猪，大体观察肺部是否有坏死出血性实变区域并伴有纤维素性胸膜炎。
2）病原检测：PCR检测与分型，提交病变肺部进行细菌培养和APP通用PCR检测，若结果为阳性，则进一步进行PCR血清分型。
➤监控猪群阴性状态
1）季度性监控：每季度采集30头育肥猪、30头基础母猪群样本，使用ApxIV ELISA检测。
2）引种监控：每批次引种后备，需要用ELISA与PCR共同检测，只引种传胸阴性的后备母猪。
04总结
因急性传染性胸膜肺炎的临床症状与大体剖检病变等都比较典型。故可以通过临床症状与大体组织病变做出初步诊断。但现场确诊，仍需要进行肺部病料的PCR检测。同时，需要对感染菌株的血清型进行鉴别，以便于指导APP疫苗的选择。药敏试验，有利于指导临床用药，提高药物使用的科学性。
