保育群中大约有1%的仔猪会由于体弱、营养不良或行动迟缓以及易感蓝耳病或链球菌病等而造成损失。除此之外,体重较轻或营养不良的仔猪也会由于PFTS现象(断奶成长不足综合征),使其断奶后虽没有出现呼吸道、消化道或全身性症状,但会因为采食量较低而变得逐渐消瘦。一些仔猪还会出现其他能够引起食欲下降、发热、呼吸困难或体重降低的消耗性疾病。血液成分的测定对诊断、治疗和分析许多疾病的预后情况非常有价值,另外,通过对血液成分的测定来监控猪群的健康状况,可以在猪群还未表现出发病症状之前,及早发现异常。因此,将测定血液成分作为常规诊断方法,有助于我们早期确诊疾病或发现保育猪对疾病的易感性,从而减少发病死亡造成的损失。
正常血液成分发生变化能够说明环境改变影响了保育猪的生理状态,这种关系的确定可以帮助生产人员对猪群采取更好的管理措施,从而提升猪群的健康状况。本研究作为保育猪安乐死研究的一部分,主要目的是评估血液成分分析能否作为确定保育猪对疾病易感性的指标。
1、材料与方法
研究中所有的动物使用、处理和样品采集技术均按照堪萨斯州立大学动物关怀与使用委员会推荐的方法进行。
试验中使用了58头平均体重为(5.6±1.3)kg的断奶仔猪,这些猪的断奶日龄在21~28天之间。断奶时随机从3个保育舍的14栏中挑选后,将其饲养于环境可控的保育栏内。每个保育栏的尺寸为2.74 m×3.05 m,单栏饲养量为27~29头,栏内安装有一个自动饮水器和一个双面式喂料器。日粮以玉米、高粱和大豆粉为基础配制。试验第一天采集所有猪的血液样品,之后兽医将猪分为两类:健康或异常,其中异常猪不是指猪有外伤或脓肿,而是有明显可见的发病症状,这些症状包括但不局限于咳嗽、明显体弱、腹部鼓胀、明显脱水或营养不良、嗜睡和消瘦等;健康猪则不能出现上述这些症状。采集血液前饲料正常饲喂。
2、血液采集与分析
研究中用到的仔猪,由于一些猪的具体出生日期不详,在试验的第一天时,其日龄大约为21~28日龄。采血时,在连续3天的采集中,每头猪由兽医随机选择,其中第一天20头、第二天22头、第三天16头,采完血后的猪单独观察24~32小时。每头猪约采集15 mL血液,其中9 mL放入含K2EDTA的抗凝管内,用于分析一些应激相关激素;6 mL放入肝素抗凝管内,用于分析血象和离子浓度。样品采集完后,将猪称重、打耳标。
肝素抗凝管内的血液在离心前,取出一小部分用于测定乳酸、葡萄糖的含量,钙、钾、钠的离子浓度和血红蛋白的浓度,红细胞压积、pH值、氧及二氧化碳的分压。
在乳酸和iSTAT测定完成后,将样品在室温条件下1 000 g(离心力单位)、离心15分钟,离心得到的血浆转移到聚丙烯管内,冷冻保存至测定皮质醇和儿茶酚胺含量。
血浆中皮质醇含量的测定采用Coat-A-Count试剂盒、配合Packard Cobra Gamma计数器进行。该方法的回收率为100.14%、重复性为90.45%。
血浆中的肾上腺素和去甲肾上腺素用活化后的氧化铝和0.1 M的次氯酸分离,并根据Holladay和Edens介绍用HPLC法进行重复测定。该方法采用添加标准添加回收法时,其回收率为83%~87%、样品内重复间的变异系数(CVs)≤5%。如果测定中样品的重复性>5%,则应进行重新测定,直至变异系数达到可接受程度。
3、试验猪的安乐死与剖检
试验结束后,猪只采用逐渐增加的低氧麻醉(约每秒钟36.9 m)或二氧化碳气体进行安乐死处理。猪只死亡后,将其分为3种类型:死亡前存在病变(病变与安乐死无关)、有明显的肺部病变(病变与安乐死有关,局限于肺部但不包含肺部的发绀)、没有明显病变。基于本文的需要,我们在此讨论死亡前存在病变的猪只与其健康状态之间的关系。
4、统计分析
试验得到的数据采用多线性模型和卡方方法分析。
5、结果
各组血液指标的结果见表1。健康保育猪的葡萄糖和钠离子浓度高于不健康猪;不健康猪的血红蛋白浓度和血细胞压积高于健康猪;其他检测指标如肾上腺素、去甲肾上腺素、皮质醇、钾离子、乳酸、pH值或氧分压等方面,二者无显著性差异;健康猪的钙离子浓度和二氧化碳分压呈好于不健康猪的趋势。
安乐死后,一头健康猪和两头不健康猪的肉眼可见肺部病变确认是与健康状况有关,而与安乐死无关。这种肺部的病变对任何年龄段、任何健康状况的猪来说,都较为少见。健康猪和不健康猪群中出现的肺部病变数量无显著性差异。
6、讨论
本研究中测定的血液指标包含了与应激、代谢或营养状况相关的指标以及血液成分指标。这些指标发生变化,意味着机体正常生理状态被打破,因此通过对这些指标的监测,有助于早期发现疾病或处于亚临床状态的猪只。
从本次研究的结果来看,不健康保育猪主要呈脱水或营养不良状态。不过,结果并未说明出现这一状况的原因。Anderson等人发现断奶后5天小型猪的正常红细胞压积为29.8%~32.8%。本研究中,不健康保育猪的平均红细胞压积显著高于健康猪,这一数值的异常升高会影响心脏功能,可能是造成脱水或厌食的原因。例如,Xin等人禁锢22~26日龄的仔猪72小时,发现在试验开始时红细胞压积升高,并在整个禁锢期内持续升高(33.5%~40.1%)。与之相比,本研究中的仔猪大约为28日龄,且未受到禁锢,但归类入不健康群的仔猪,其平均红细胞压积为35%,这一数值接近Xin等人试验中的下限,所以该群中的仔猪确实呈不健康状态。
据报道,21~28日龄仔猪的正常血红蛋白水平为9.2~10.5 g/dL。本研究中,健康仔猪的这一指标位于正常范围之内;而不健康仔猪的这一指标偏高,分析原因可能是由于脱水或营养不良所致。
我们的试验显示,不健康仔猪的葡萄糖浓度低于健康仔猪,这也可能是仔猪出现厌食、脱水或二者都有的反应指标。仔猪正常的血液葡萄糖浓度为65~95mg/dL。本研究中不健康仔猪的葡萄糖浓度在这一参考范围内,但与健康仔猪相比偏低。这一结果与Gentz等人的结果一致,Gentz等将产房仔猪禁锢120小时,发现初生、1日龄、3日龄、9日龄和16日龄仔猪的血糖浓度呈持续降低趋势。
3周龄仔猪的正常血清钠离子含量为(144.9±2)mmol/L。本研究中,两组仔猪的该指标水平均低于正常水平。Accensi等给3组断奶仔猪(大约42日龄)分别饲喂呕吐毒素(DON)含量为280、560和840 μg/kg的日粮,结果显示,与对照组相比,三组仔猪血液中的钠含量均无显著差别。这一结果提示我们,尽管猪只采食量会下降,但血液中的钠离子水平不一定会降低。本研究中不健康猪的其他血液指标提示我们这些猪可能出现了脱水或营养不良等。结合Accensi等人试验中的其他结果,我们认为造成这些仔猪血钠水平偏低的原因可能与其他因素有关。
14~35日龄仔猪正常的血清钙离子浓度为10.9~11.5 mg/L。我们的研究显示健康猪的钙离子浓度要高于不健康猪,不过这两组猪的钙离子浓度都要低于上述参考值。
猪的正常二氧化碳分压为(40±3)mmHg。本研究结果显示,健康猪的该指标水平高于不健康猪,但后者的水平仍处于参考范围内。生产中,二氧化碳分压可以作为应激的指示剂,其与新生仔猪的肾上腺素水平呈正相关。因此,研究中的不健康仔猪可能处于轻微应激状态。
研究中的两组试验猪没有一组的肾上腺素或去甲肾上腺素显著升高。其他血液指标如钠、葡萄糖含量和红细胞压积等的显著变化,提示我们这些仔猪可能发生了衰弱、呼吸困难、脱水或厌食。不过,能够引起这些症状的刺激因素不一定能够使相关血液指标升高。
仔猪的肺部病变以及其他一些原因导致不健康仔猪逐渐消瘦。
根据本研究结果,仔猪的健康状况可以在一定时间内通过对血液成分的分析来确定,从而及时发现尚未表现出外观疾病症状的不健康猪,进而生产人员能够提前采取预防措施或对该类猪只早期淘汰。
7、结论
对血液葡萄糖、钠、血红蛋白含量和红细胞压积的测定有助于对保育猪消耗性疾病进行早期检测或研究。
血液指标的测定结果提示我们,猪群中的不健康猪可能发生了厌食和衰弱情况。