大家好，今天给大家分享一篇来自淮阴师范学院团队和扬州大学团队于2020年在《Journal of Applied Microbiology》发表了题为“Isolation and characterization ofStreptococcus suisstrains from swine in Jiangsu province,China”的文章。

摘要

　　目的：本研究旨在调查中国江苏省存在的猪链球菌菌株。

　　方法与结果：共采集了来自临床上健康猪的1650份鼻腔和肛门拭子样本以及100份扁桃体样本。通过培养特性、菌落形态和基于谷氨酸脱氢酶(gdh)基因的PCR分析进行猪链球菌鉴定，确认8株分离物为猪链球菌。通过凝集试验鉴定分离株血清群，包括4、7、3、5和8型。PCR基因分析显示manN、purD、orf2、gdh基因在分离株中是保守的，50%的分离株携带dltA、pgdA、srtA和sspA基因。抗菌药物敏感性测试显示，这些分离株对克林霉素、红霉素、四环素、青霉素G、万古霉素和利奈唑胺表现出耐药性；而对氯霉素无耐药性，大多数分离株显示多重耐药。最后，通过斑马鱼评估，分离株RD105的LD50为2.6431×10^5，HA24为7.1198×10^6，这表明RD105更具毒力，与毒力因子鉴定结果一致。

　　结论：健康猪中猪链球菌比例非常低。毒力因子与致病性相关。南通地区的细菌比淮安地区的细菌具有更大的毒力潜力。

　　研究意义与影响：对猪链球菌的系统调查为预防和控制猪链球菌病提供了最基本的理论支持。

　　1 猪链球菌的分离与鉴定-低检出率隐藏高风险

　　在1740份样本中鉴定出8株猪链球菌(0.5%)，其中6株来自869份鼻腔样本(0.7%)，2株来自871份肛门样本(0.2%)，扁桃体样本未分离到任何菌株。除淮安市2株分离株外，其余6株分离株均来自南通市。

　　表2猪链球菌分离株来源统计

图1江苏省地图及样本来源地。红色区域：中国江苏省内共计采集1840份样本的城市。A、B、C、E、F点：来自淮安的样本采集点（5个养猪场）；D点：来自（淮安某）屠宰场的100份扁桃体样本。

　　2 血清型与毒力因子特征

　　血清凝集试验结果显示，来自南通猪场的四株分离株血清型为3、5、7和8。另外两个菌株RD90和MBL2未能与所有已知血清发生反应。来自淮安的菌株中，菌株HA24与血清型12、24、28和31发生交叉反应，菌株HA33血清型为4型。菌株RD47属于32型，不是猪链球菌常见的1、1/2、2和14型。所有分离株中均未发现常见的1、1/2、2和14型。这一发现对传统认知提出了挑战

　　研究团队检测了25个毒力相关基因，发现所有分离株均携带manN、purD、orf2和gdh等保守基因，而未检测到salK/salR、通透酶、血清不透明样因子、neuB、mrp、epf或sbp2基因，约半数菌株携带dltA、pgdA、srtA和sspA基因，只有菌株RD88携带sly基因，除RD44外，几乎所有分离株都发现了gapdh和NT7基因。基因型epf-/mrp-/sly-最为普遍，存在于7个分离株中，其次是epf-/mrp-/sly+，存在于1个分离株中。南通地区的菌株携带的毒力相关基因数量明显多于淮安地区，同时存在sortaseA、pgdA、sspA、二肽基肽酶IV和IgA1蛋白酶；特别是菌株RD105拥有最多数量的毒力相关基因(15/25)。

　　表3 8株猪链球菌分离株的血清型及25种毒力相关因子的分布情况


　　3 药物敏感性与致病性评估

　　药敏试验显示，这些分离株对兽医常用的抗生素表现出耐药性：总体而言，分离株对四环素(4/8)、青霉素G(4/8)、氯霉素(0)、利奈唑胺(4/8)、克林霉素(8/8)、红霉素(6/8)和万古霉素(4/8)表现出耐药性。更严重的是，6株分离株呈现多重耐药性，表现出不同的耐药模式，菌株HA33、RD105对3种抗生素药物耐药或菌株RD44对测试的所有抗生素耐药。

　　表4 8株猪链球菌分离株的抗菌药物敏感性检测结果


　　研究团队选取两株代表性菌株(dltA+/pgdA+/srtA+/sspA+)和HA24(dltA-/pgdA-/srtA-/sspA-)进行斑马鱼感染实验。结果表明，RD105较HA24具有更强的致病性，与其携带更多毒力基因的结果相符。

　　4 防控启示与建议

　　4.1对养殖户与猪场

　　“健康猪”不代表“无毒猪”，引种、混群前最好做病原筛查，并建立“猪链球菌定期抽检”制度，重点监测鼻腔拭子，发现高毒力基因菌株立即隔离或淘汰。严格按照药敏试验结果选用抗菌药物，减少“经验性用药”，更不能把抗生素当保健品，推行轮换用药制度。同时，养殖人员需做好个人防护，避免直接接触病猪或污染物，降低人感染风险。

　　4.2对屠宰与生鲜行业

　　扁桃体带菌率0%，看似安全，但鼻腔、肛门仍可能排毒，冷链运输、交叉污染要抓到位；处理生猪肉戴手套、勤消毒，避免伤口感染——人感染猪链球菌最常见途径就是“手上有伤口还去剁生骨”。

　　4.3对疫苗与科研

　　传统“mrp/epf/sly”三价疫苗可能不够，毒力新基因（dltA、pgdA、srtA、sspA）值得纳入下一代多联疫苗，同时也不能仅依赖血清型或单一毒力基因，应结合动物实验综合评价。