裸藻源β-1,3-葡聚糖是被广泛认可的高效免疫调节剂,它可以提升动物机体免疫力,在人和动物中都有很好的推广和应用,研究成果也在不断推陈出新。2022年底在国际知名兽医杂志Open Veterinary Journal发表了一篇其在猪上的研究成果,题目和作者见图1。题目简单地说明了β-葡聚糖对非洲猪瘟病毒的影响,从文中材料与方法可知其葡聚糖为线性裸藻源β-1,3-葡聚糖。本篇译文将挑选几项重点研究结果,以飨读者。
图1β-葡聚糖的免疫效果研究发表文章题目截图
01
目的
在这项研究中,作者以猪肺泡巨噬细胞(PAM)模型研究裸藻源β-1,3-葡聚糖对PAM活力的作用效果。
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材料与方法
为评估裸藻源β-1,3-葡聚糖对猪肺泡巨噬细胞的潜在影响,本研究采用MTT比色法评估裸藻源β-1,3-葡聚糖对免疫细胞增殖的影响。
收集猪肺泡巨噬细胞,通过血细胞计数器计数,使用培养基对原代肺泡巨噬细胞进行稀释,使细胞浓度为106个/ml。
将该细胞悬液用100μl移液器均匀分配到96孔微量滴定板中,并在5%CO2中孵育24小时,培养温度为37°C。
用0μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖(对照组)、30μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理肺泡巨噬细胞2小时,然后使用103HAD50/ml的越南非洲猪瘟病毒(ASFV)HN02毒株攻毒。
在5%CO2、37°C条件下孵育24、48、72、96和120小时,使用MTT试剂盒测定细胞增殖结果,通过实时荧光定量PCR进一步检测裸藻源β-1,3-葡聚糖对越南分离的田间ASFV毒株的潜在影响。
使用夹心酶联免疫吸附测定法检测裸藻源β-1,3-葡聚糖诱导的干扰素(IFN)-α和白细胞介素(IL)-6的浓度。
03
结果与讨论
3.1 裸藻源β-1,3-葡聚糖能促进猪肺泡巨噬细胞的活力
用30和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理猪肺泡巨噬细胞2小时,对照组未加入裸藻源β-1,3-葡聚糖处理,然后使用103HAD50/ml的越南非洲猪瘟病毒(ASFV)HN02毒株攻毒,在5%CO2在37°C条件下孵育24、48、72、96和120小时,用MTT试剂盒测定细胞增殖,结果如图2所示。
图2 MTT比色法测定β-1,3-葡聚糖对PAM细胞活力的影响
图表来源:Open Veterinary Journal,2022
结果表明,与对照组相比,30或50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖处理组能够以剂量依赖性方式提高细胞存活率,并且这些效果一直持续到120小时。
3.2 裸藻源β-1,3-葡聚糖对猪肺泡巨噬细胞有免疫增强作用
使用30μg/ml和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理PAM 2小时后,暴露于103HAD50/ml ASFV持续12、24小时。
收集上清液,然后对ASFV的DNA p72基因进行实时PCR扩增,检测裸藻源β-1,3-葡聚糖处理的PAM中病毒DNA的拷贝数,结果如图3所示。
与对照组相比,使用裸藻源β-1,3-葡聚糖处理的PAM感染12小时后的病毒滴度显著降低。
图3裸藻源β-1,3-葡聚糖对PAM抗病毒活性的影响
图表来源:Open Veterinary Journal,2022
3.3 高剂量的裸藻源β-1,3-葡聚糖显著增强了病毒感染后PAM中IFN-α和IL-6的产生
用30μg/ml和50μg/ml裸藻源β-1,3-葡聚糖预处理PAM 2小时并设立对照组,然后暴露于103HAD50/ml ASFV病毒条件下,持续12小时(A、C)和24小时(B、D)产生的细胞因子IFN-α和IL-6如图4。
图4裸藻源β-1,3-葡聚糖处理PAM后感染ASFV产生细胞因子的浓度对比
备注:
A:12小时IFNα浓度(pg/mL)
B:24小时IFNα浓度(pg/mL)
C:12小时IL-6浓度(pg/mL)
D:24小时IL-6浓度(pg/mL)
图表来源:Open Veterinary Journal,2022
与对照组相比,裸藻源β-1,3-葡聚糖(30μg/ml和50μg/ml)两个处理组在12h时IFN-α和IL-6的产生均显著增加,并持续到24h。
高剂量的裸藻源β-1,3-葡聚糖显著增强了感染后PAM中IFN-α和IL-6的产生。
04
结论
本研究结果揭示了裸藻源β-1,3-葡聚糖对ASFV的影响,其作用机制可能与细胞免疫反应有关,且对裸藻源β-1,3-葡聚糖存在剂量依赖作用。
此外,研究还表明,裸藻源β-1,3-葡聚糖可以显著提升宿主免疫力。