储存温度和时间对PRRSV RT-PCR检测的影响
来源： 硕腾猪业 2024-03-05 08:55:01| 查看：
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原文标题：Effect of storage temperature time on PRRSV RT-qPCR testing
PCR结果的准确性受到样品采集、储存、运输和处理过程以及存储温度和时间的影响。尽管这是共识，但是这些影响因素对病毒RNA的影响缺乏探索和量化。本研究通过RT-PCR定量分析存储温度、时间对血清、口腔液和粪便中PRRSV RNA和猪内参基因（internal sample control,ISC）检测的影响。本研究中的血清（n=5）来自实验性感染PRRSV野毒的猪，口腔液（n=5）、粪便（n=5）样本来自免疫PRRSV MLV单独饲养的猪。
每一个样本被分为28等份，500µL/份，每份对应一种温度和时间的处理组合，即4℃、10℃、20℃和30℃，每种温度处理分别对应24、48、72、96、120、144或者168小时处理时间。处理结束后采用RT-qPCR进行定量检测PRRSV和ISC。将RT-qPCR的结果――定量循环数（quantification cycle,Cq）进行立方根转换，并将其定义为“标准效率循环值”（efficiency standardized Cqs,ECqs）用于分析。温度和时间的影响采用Rv.4.2.1进行混合效应回归模型分析（表3），得到不同温度下每经过24h PRRSV RNA的RT-qPCR的下降值，括号内为下降的百分比。
总之，在本研究结果中，血清保持在4℃、10℃和20℃下186小时对PRRSV的检测没有影响，但是保存在30℃时会导致PRRSV RNA的检测值的损失。猪血清在4℃和10℃时，ISC稳定，但是在20℃和30℃时可观察到明显影响。无论在什么温度下，口腔液和粪便中PRRSV和ISC RNA都不稳定。基于这样的结果，我们建议采用RT-qPCR检测PRRSV的血清样本应存储在≤20℃。相反，口腔液和粪便样本，在检测以前应当冷冻保存（-80℃），避免PRRSV RNA的降解，即出现假阴性。
来源：2023 NAPRRS/NC229:Proceedings of International conference of Swine Viral Diseases
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