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当前猪场如何做好非洲猪瘟监测预警

来源：华派生物俱乐部 2021-07-16 09:36:35| 查看：次

　　今年养猪业面临饲料上涨、猪价下跌和疫病发生风险高等多重压力，猪场要想持续发展必须做好转型升级、降本增效工作。而猪场安全，特别是猪场疫病的有效防控是发展之第一要务。2020年下半年以来，我国非洲猪瘟流行毒株呈多样性，临床表现也更加复杂，当前又是高温雨季，非洲猪瘟防控压力山大。非洲猪瘟检测预警是科学防控的前提和基础，本文将就当前猪场如何做好非洲猪瘟检测预警进行详细介绍，供养猪从业者参考。
　　
　　01流行情况更加复杂
　　
　　1.1 病毒污染面广，流行毒株多样
　　
　　2018年下半年，非洲猪瘟传入我国以来，迅速传播到我国主要养猪地区，该病毒已在我国定植，其污染面非常广。2020年下半年，北方非洲猪瘟疫情形势较为严峻，部分地方去产能明显。当前处于雨季和高温高湿季节，南方部分地方疫情多发，养猪户损失惨重。
　　
　　2018年至2020年上半年，我国流行的非洲猪瘟病毒绝大多数属于基因ǁ型强毒株（Georgia 2007毒株）；但据中国动物卫生与流行病学中心、军事兽医研究所和哈尔滨兽医研究所等多家研究单位的公开报道，2020年下半年，国内猪群非洲猪瘟病毒毒株已明显呈多样性，经典强毒株和变异株共存，变异株包括基因缺失株、自然变异株、自然弱毒株等。
　　
　　1.2 非洲猪瘟强毒株临床表现
　　
　　流行毒株的多样性，加大了非洲猪瘟临床表现的复杂性。非洲猪瘟强毒株临床表现为最急性和急性型：感染后通常3-5天就会表现出明显的症状，体温升高达42℃，精神沉郁，厌食，皮肤发红，耳、四肢、腹部皮肤有出血点，呕吐，血小板减少，伤口流血不止；母猪流产；呼吸困难，病程延长则出现瘫痪、抽搐等其他神经症状；病死率极高；病程一般4-10天。据哈兽研攻毒试验：SPF猪肌注接种不同剂量的高致病性毒株（Pig/HLJ/18株）后，2-3天血液病毒核酸检测阳性，3-4天出现发热等症状，4-5天口腔及肛拭子样品病毒核酸检测阳性，6-10天内接种猪全部发病死亡；同居接触猪同样全部发病、死亡，与接种感染猪相比，同居感染病毒血症、发病、排毒及死亡时间均延后5-8天不等，口腔拭子6天后、血液9天后、肛拭子10天后ASFV核酸阳性。非洲猪瘟强毒株感染、发病、排毒比较有规律，随着病程的发展,排毒量增加，Ct值减小。这也是非洲猪瘟早期检测和精准清除的基础。
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　　1.3 非洲猪瘟变异弱毒株的临床表现
　　
　　2020年6月到12月期间，哈尔滨兽医研究所对中国北方7个省份进行了非洲猪瘟病毒监测，总共分离出22株病毒，均为基因ǁ型，其中11株病毒在EP402R基因（编码CD2v蛋白）上有不同形式的变异或缺失，并且表现非红细胞吸附（non-HAD）。非红细胞吸附变异株相比典型强毒致病力降低，但仍具有明显的残留毒力，较高剂量接种猪可引起亚急性、慢性病程和部分死亡，较低剂量感染则主要引起持续感染和慢性病程，具有很强的水平传播能力。这些变异株临床表现具有一定的隐蔽性，排毒量较低，也不规律，早期诊断困难，为我国非洲猪瘟防控带来全新的挑战。面对非洲猪瘟弱毒株的防控，猪场需科学认识、放弃幻想、严防死守，避免无妄之灾。
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　　02核酸检测方案优化
　　
　　根据当前非洲猪瘟流行的情况，在样品采集、检测重点、检测方法、检测质量控制等方面要进一步优化，严格控制。
　　
　　2.1 对于非洲猪瘟的防控最好是将病毒挡在猪场外面，猪场应减少场内外人员、物资进出的频次，强化人员、车辆、物资等的管理，有效消毒，严格检测。
　　
　　2.2 猪场内也要做好环境的检测，对圈舍、走道、药房等区域采样检测。每周对猪群进行病原和抗体检测。猪群转群、分娩、免疫、温差过大等应激会促进非洲猪瘟病毒的复制，因此可以在猪群受到应激刺激后第2-3天内及时采咽拭子、尾根血、胎衣液等样品检测，以提高检出率。

　　以下视频来源于一森说
　　

　　2.3 对可疑猪，按检出概率高低排序，依次采集深部咽拭子、淋巴结（微创采集）、前腔静脉抗凝血（EDTA）或尾根血、口鼻拭子。对分娩母猪，应采集脐带血、胎衣；对死胎和流产胎儿，应采集淋巴结、脾脏等组织样品。在采样的过程中一定要防止交叉污染。
　　
　　2.4 提高样品检测的准确性。（1）非洲猪瘟荧光PCR检测室应分为试剂准备区、样品处理区和核酸扩增检测区，各功能区间需物理隔离；（2）要规范处理样品，棉拭子要加生理盐水震荡浸泡，如果做混检，混样数量尽量不要超过5个；（3）要选择敏感的核酸提取试剂盒，不同的提取试剂盒差异比较大，现在多采用磁珠法，用核酸提取仪自动提取；有条件时最好每次加一个阳性对照，对核酸提取的过程进行监控；（4）采用荧光PCR扩增试剂盒检测，可用P72单重荧光PCR，P72-CD2V双重荧光PCR或者P72-CD2V-MGF三重荧光PCR方法；可以适当增加荧光PCR检测的循环数，提高其敏感性；（5）一定要严控实验室污染，移液器用带滤芯的枪头，各区间的加样器不要混用，扩增检测后的PCR管严禁开盖，保持实验室环境的整洁和卫生，定期用84消毒液和酒精对实验室消毒。
　　
　　2.5 检测结果要和猪群生产数据、临床表现结合起来。非洲猪瘟的检测只针对采样时的状态，而疾病的发生、发展有一个过程；也可能因为采样质量低，实验室检测不规范，检测试剂盒不敏感，操作失误等出现假阴性；而实验室污染则可能出现假阳性。因此，当检测结果与猪群临床表现和生产数据等不相符时，要注意重检复核。
　　
　　03非洲猪瘟抗体检测
　　
　　ASFV抗体在感染早期（7-10天）就可被检测到，并且会持续相当长的时间。而ASFV抗体阳性，是机体感染该病毒的最直接证据。GB/T 18648-2020中详细介绍了ELISA间接、阻断（竞争）、夹心等方法的步骤及结果判读。该方法适用于亚急性、慢性及大规模血清筛查，但不适用于急性病例（检测到抗体前机体已经死亡）。抗体检测是病毒核酸检测的重要补充，通常用于引种检测，基因缺失毒株感染检测。目前，很多规模场已将非洲猪瘟抗体的检测列入日常监测项目。
　　
　　华派生物研制的“非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒”对2016年留存的近2000份猪血清检测结果均为阴性，对猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬等常见猪病的阳性血清检测也均为阴性，可见该试剂盒特异性强；对阳性质控血清的阳性检出率为100%，对标准阳性血清检测最低稀释度可达1:6400，灵敏度高；批内和批间检测结果变异系数小，具有很好的重复性。该试剂盒的研制为非洲猪瘟的防控，特别是变异弱毒株的防控提供了强有力的工具。
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　　总之，非洲猪瘟核酸和抗体的科学、及时、准确监测是猪场防非降本的重要技术支持手段。对于非洲猪瘟核酸阳性的猪群不要抱有幻想，即使是变异弱毒株，其对猪群生产成绩造成的影响也是无法估量的。当前，非洲猪瘟强毒株精准清除措施仍然有效。种猪场对于非洲猪瘟变异株的防控应更加严格，很多猪场发现时疫病已经扩散，因此，发现阳性猪舍，要做好整栋清除的准备，不再做无谓的单点或多点拨牙；对阴性猪舍，可实施封场管理，但要做好相应线路规划和物理分隔；静默生产时间至少28天。猪场应将非洲猪瘟核酸检测和抗体检测列入日常监测项目，一旦有异常情况，要及时采取相应措施。
　　
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