大肠杆菌最早是由Escherich于1885年发现的, 大肠杆菌属于人和动物体内的共生菌,也是条件性致病菌。大肠杆菌为革兰氏阴性菌,可导致多种动物疾病,甚至威胁到机体生命健康。特定血清型可以引起各种动物败血症,家禽卵巢炎,仔猪黄白痢、猪水肿等各类疾病。由于养殖场滥用抗生素,甚至水源,土壤抗生素的超标,使得病原菌不断出现变异,甚至高耐药性病原菌不断涌现。现代养殖业不断发展壮大,集约化养猪规模的不断扩大,使该病的流行呈现出不断上升的趋势,该病也给全球的养猪业造成了较大的经济损失。
一、背景
河北某猪场饲养母猪600余头,自繁自养,一点式生产。猪场依山而建,具有天然的隔离条件。猪场主要疫苗按照常规免疫,发病前临床均稳定,仔猪出生3天头孢保健,转群后保育猪添加阿莫西林一周。2018年11月份该场产房内出现急性死亡病例,发病日龄为10-15日龄,母猪未见异常情况。最初产房发病猪为1-2头,病程约3天左右开始死亡,很快波及同窝仔猪,并很快蔓延到整个产房,死亡率为100%。
二、临床表现
临床上表现为仔猪突然发病,不会吮乳,有部分猪出现呕吐,精神沉郁(图一),呼吸困难,体温升至41度左右。发病仔猪不表现拉稀,体表检查发现发病猪蹄部有破溃,脐部周围出现大片紫色发绀区域(图二、三)。死亡后表现为全身发绀现象(图四)。在治疗方面,畜主采取头孢,磺胺,林可霉素,氟苯尼考等多种药物治疗均无效。临床上无任何改善,死亡率依然为100%,损失巨大。临床解剖发现所有死亡猪病变主要集中于腹腔。剖开腹腔有一股刺鼻的气味,类似于污水沟的污水气味。腹腔积液严重,肠道出现腐败(图五、六),严重者肝脏也出现腐败,用手触摸肝脏和肠道,质地非常脆。解剖了多头均出现类似共同的症状。胸腔等其他脏器未见明显异常。
图一 呕吐,精神沉郁
图二 脐带周围发绀
图三 脐带部位潮湿
图四 病猪死后全身发绀
图五 肠道腐败
图六 肠道腐败
三、实验室检测
猪场自行送往河北某实验室检测常规病毒,发现圆环病毒阳性,蓝耳,伪狂犬等均为阴性。经过解剖分析,笔者判断此病为细菌性疾病,令人疑惑的是为什么用不同的抗生素均无效果?而且母猪未有异常表现?为了弄清真相,采取肠道,血液,淋巴,肺脏,脾脏委托国内某著名实验室进行细菌分离鉴定。分别接种麦康凯培养基(图七),THB。其中血清,淋巴结,小肠培养的菌落形态单一。挑取单个菌落进行染色镜检,发现引起此次严重疾病的细菌竟然与大肠杆菌的形态一致。
图七 麦康凯培养基培养的单一菌落
四、PCR检测
对分离的细菌进行PCR分群检测yjaA目的基因片段为211bp、TspE4.C2目的基因片段为152bp、ChuA目的基因片段为279bp(图八)。一般认为B2和D进化群的大肠杆菌毒力比较强。其中B2群被认为是最容易产生强毒力大肠杆菌的进化群。此次从一份病料中分离到了两个进化群的大肠杆菌,十分罕见。其中一株被鉴定为B2进化群,一株被鉴定为D进化群。
图八 PCR分群鉴定
五、药敏试验
将待检菌接种于THB培养基上,涂布均匀,贴上7种常见药敏试纸:青霉素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟、复合磺胺、庆大霉素、链霉素、妥布霉素,培养皿于37 ℃培养,18-36小时观察抑菌环大小。经过药敏试验发现分离到的两株大肠杆菌对青霉素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟、复合磺胺、庆大霉素、链霉素、妥布霉素都产生高度耐药性,抑菌圈直径为0(图九)。因此引起本次严重死亡的细菌为两株高耐药性的大肠杆菌。
图九 药敏试验抑菌圈
六、治疗
通过解剖分析,怀疑引起感染的渠道为脐部感染,因此建议用硕腾公司的百胜-30消毒液1:300从出生开始连续三天,每天2次脐带消毒。一日2次清洗母猪乳房,消毒所有的剪牙和断尾设备。增加产床和产房消毒,经过连续处理后新生仔猪不再出现感染,效果明显。
七、原因分析
(一)由于猪场不当使用抗生素,特别是有些原粉类的抗生素,长期使用极易造成耐药菌株的产生。
(二)管理不严,没有严格执行消毒细则,特别对于脐部,剪牙,断尾,阉割,器具等需要认真消毒,避免伤口带来的感染。
(三)环境消毒没有引起重视。高度密集的规模化猪场,消毒是非常重要的,可以有效降低环境中的病原含量,使发病的机会大大降低。
八、讨论
大肠杆菌为猪场的常见细菌,特别是黄白痢,几乎困扰每个猪场,增加仔猪死亡率及引起窝断奶重的降低。另外最近几年PED广泛流行,如果PED和大肠杆菌混合感染,导致腹泻持续时间更长,疾病更难控制。同时针对大肠杆菌进行药物灌注预防是不提倡的,容易引起新生仔猪胃肠道紊乱以及产生耐药性问题。针对大肠杆菌的控制,建议选择硕腾公司的大肠杆菌二联六价疫苗“利特佳”进行产前注射来控制仔猪红黄白痢,对于预防大肠杆菌病效果显著,同时减少产生高耐药性大肠杆菌带来的风险。